B.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
(1) 菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 6538株，大腸桿菌桿菌8099和白色念珠菌ATCC 10231株。參照《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版第一分冊(cè)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》第2.1.3.1和2.1.3.3條制備懸液。
(2) 載體：根據(jù)推薦消毒的對(duì)象，選擇合適的載體，可供選擇的載體有：玻璃片、不銹鋼片（或圈）、
塑料片、鋁片、布片等。載體大小一般為1.0cm?1.0cm。
GB  ××××－××××

(3) 稀釋液和洗脫液：稀釋液采用磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L,pH7.2）；洗脫液用含中和劑的PBS。
(4) 生物學(xué)指示物：將一定量的指示菌株懸液污染在滅菌載體上，待干燥后，進(jìn)行試驗(yàn)。
(5) 采樣規(guī)格板：5. 0cm?5.0cm。
(6) 培養(yǎng)基:對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌,采用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；對(duì)白色念珠菌，采用沙堡氏培養(yǎng)基。
B.2.2 實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)
(1) 將染菌載體(生物學(xué)指示物)放于臭氧消毒柜內(nèi)，四角和中央各放一個(gè)，使其充分暴露。
(2) 關(guān)閉消毒柜。
(3) 開(kāi)臭氧發(fā)生器，至柜內(nèi)臭氧濃度達(dá)到要求時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)。
(4) 設(shè)定四個(gè)作用時(shí)間，每到一個(gè)作用時(shí)間，取出生物指示劑一個(gè)，放入含10ml洗脫液和20粒玻璃珠的小三角燒瓶?jī)?nèi)。
(5) 對(duì)洗脫液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)：取其原液或適當(dāng)稀釋液0.5ml，接種于無(wú)菌平皿，傾入融化并涼至45℃瓊脂培養(yǎng)基，搖勻，置恒溫箱培養(yǎng)48小時(shí)。
(6) 對(duì)照樣片除不暴露于臭氧外，其他處理方法同消毒組樣片，對(duì)照組生物指示物為與消毒組同批的生物指示物，在同樣溫濕度下放致最長(zhǎng)消毒時(shí)間后才開(kāi)始洗菌。
    (7) 本試驗(yàn)重復(fù)三次，取其平均殺菌率。
（8） 結(jié)果分析
①殺菌率的計(jì)算
可用下述公式計(jì)算殺滅率：
 
②結(jié)論：每個(gè)位置生物指示物的平均殺滅率均達(dá)到≥99.9%，則可判定為消毒合格。
B.2.3 模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)
      (1)人工染菌實(shí)物為消毒試驗(yàn)對(duì)象，可選擇油漆木板表面，陶磁磚表面，搪磁用具表面，陶磁用具表面等。
（2）染菌：取消毒試驗(yàn)對(duì)象5塊進(jìn)行滅菌處理，用沾有菌液的棉簽對(duì)畫出的試驗(yàn)區(qū)染菌（來(lái)回涂布，至菌液布滿），在無(wú)菌環(huán)境中干燥后，進(jìn)行試驗(yàn)。務(wù)使染菌量達(dá)到5×105～5×106/cm2。
（3）將染菌試驗(yàn)對(duì)象放臭氧消毒箱（或消毒柜）內(nèi)最難達(dá)到消毒的部位，開(kāi)啟臭氧消毒器，作用至預(yù)定時(shí)間時(shí)，取出消毒試驗(yàn)對(duì)象，用沾有含中和劑的PBS棉簽，用擦拭法（每區(qū)橫豎往返各8次）采樣。剪掉采樣棉簽頭部棉花，使落入含5ml采樣液的試管中，振打80次或放電動(dòng)振蕩器上振1分鐘，吸取其原液或稀釋液接種平皿，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
（4）對(duì)照組采用同樣方法采樣、洗菌和培養(yǎng)，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，采樣時(shí)間應(yīng)與消毒組最后一個(gè)樣本同時(shí)進(jìn)行。
（5）結(jié)果分析：
殺滅率可用下述公式計(jì)算

GB  ××××－××××

結(jié)果判定：各次殺滅率和平均殺滅率均≥99.9％的作用時(shí)間，為最低作用時(shí)間。
本試驗(yàn)應(yīng)重復(fù)三次。試驗(yàn)溫度為20±2℃，相對(duì)濕度為70～80％。試驗(yàn)菌液中應(yīng)加有50％血清。
B.2.4 現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)
按照實(shí)際使用條件，以自然菌為試驗(yàn)微生物，以實(shí)際消毒物品為試驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行試驗(yàn)，檢測(cè)樣本數(shù)應(yīng)≥30份。
（1）隨機(jī)抽取消毒物品，用5×5cm2規(guī)格板選定對(duì)照區(qū)用沾有含中和劑的PBS棉簽擦拭采樣（橫豎各8次），將棉簽頭剪入采樣液試管內(nèi)（含采樣液5ml），振打80次或電動(dòng)振蕩1分鐘。取其原液或稀釋液，接種平皿，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，為對(duì)照組。
（2）將選定的消毒對(duì)象放入臭氧消毒箱內(nèi)消毒至預(yù)定時(shí)間取出，用和對(duì)照組同樣方法采樣，洗菌，接種，培養(yǎng)，為試驗(yàn)組。
（3）結(jié)果分析
可用下述公式計(jì)算殺滅率：
 
結(jié)果判定：以每件樣品消毒后的殺滅率均達(dá)到≥90％的作用時(shí)間，為合格消毒時(shí)間。
（4）注意事項(xiàng)：參照《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版，第一分冊(cè)5.4.7執(zhí)行。