臭氧設(shè)備對(duì)空氣消毒效果的評(píng)價(jià)

B.1.1 實(shí)驗(yàn)器材和設(shè)備
（1）試驗(yàn)菌株：一般選擇金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 6538株，用其4－14代培養(yǎng)物。推薦用于特殊場(chǎng)所，例如用于結(jié)核病等消毒的臭氧發(fā)生器或臭氧消毒設(shè)備，應(yīng)增加測(cè)試相應(yīng)的微生物。注明具有殺真菌作用者，應(yīng)加測(cè)白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231株。
（2）菌懸液的制備，參照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》執(zhí)行。
（3）采樣液和稀釋液：磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L,pH 7.2）。采樣液中應(yīng)含有中和劑。
（4）采樣器：采用液體沖擊式采樣器或多級(jí)篩孔空氣沖擊式采樣器。
（5）中和劑及選擇方法：一般采用含硫代硫酸鈉的中和劑，參照《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版第一分冊(cè)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》2.4選擇合適的中和劑濃度。
（6）培養(yǎng)基：對(duì)金黃色葡萄球菌，采用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；對(duì)白色念珠菌采用沙堡氏培養(yǎng)基；對(duì)其它特殊試驗(yàn)菌，選用相應(yīng)的培養(yǎng)基。
（7）空氣消毒試驗(yàn)柜（或試驗(yàn)室）：實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)一般采用1m3的試驗(yàn)柜，試驗(yàn)柜中間高度應(yīng)有噴菌和采樣孔，如果臭氧消毒設(shè)備較大，可采用20 m3左右的大試驗(yàn)柜。模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)應(yīng)采用>20 m3的氣溶膠試驗(yàn)室?！?0 m3試驗(yàn)室在離地面1.5m高度應(yīng)有噴菌和采樣孔。試驗(yàn)柜室內(nèi)應(yīng)有控制溫度、濕度的設(shè)備。
（8）噴菌裝置：包括氣溶膠噴霧器（要求噴出的粒子90％以上直徑在1－10μm），空氣壓縮機(jī)（帶有壓力表的控制裝置）、氣體流量計(jì)等。
B.1.2 試驗(yàn)方法
     （1）調(diào)整試驗(yàn)室內(nèi)的溫度、濕度，并使其穩(wěn)定在規(guī)定范圍內(nèi)（溫度20±2℃，相對(duì)濕度70－90％）。
（2）按預(yù)試驗(yàn)選定的噴菌壓力、氣體流量和噴菌時(shí)間，同時(shí)向試驗(yàn)柜（室）和對(duì)照柜（室）噴菌。噴菌后，同時(shí)開柜（室）內(nèi)的風(fēng)扇，使細(xì)菌氣溶膠在柜（室）內(nèi)分布均勻。噴菌完畢后，繼續(xù)開風(fēng)扇5分鐘，然后靜置5分鐘。務(wù)使試驗(yàn)柜（室）內(nèi)的菌數(shù)達(dá)到5×105～5×106cfu/m3，在自然衰亡率高時(shí)，可適當(dāng)增加噴入菌量。
（3）采樣：噴菌停止后10分鐘，按預(yù)試驗(yàn)選定的壓力和時(shí)間，同時(shí)對(duì)試驗(yàn)柜（室）和對(duì)照柜（室）采樣，作為0分鐘樣本。
（4）消毒：試驗(yàn)柜（室）開啟臭氧消毒設(shè)備，使其產(chǎn)生臭氧，并記錄時(shí)間。
（5）采取消毒后樣品，至各預(yù)定消毒時(shí)間，同時(shí)對(duì)消毒柜（室）和對(duì)照柜（室）采樣。
（6）參照預(yù)試驗(yàn)獲得的參數(shù)，對(duì)兩組采樣液進(jìn)行稀釋，并采用平皿傾注法進(jìn)行接種平皿，放37℃下培養(yǎng)48小時(shí)觀察并記錄各平皿菌落數(shù)。（特殊微生物的培養(yǎng)溫度和時(shí)間，可按規(guī)定選定）。同時(shí)設(shè)同批空白培養(yǎng)基、PBS作陰性對(duì)照，接種同批試驗(yàn)菌的培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
（7）樣本采完后，對(duì)試驗(yàn)柜和對(duì)照柜(室)分別進(jìn)行消毒，抽風(fēng)，并開門通風(fēng)。為下次試驗(yàn)作好準(zhǔn)
GB  ××××－××××

備。
B.1.3 正式試驗(yàn)重復(fù)三次，分別計(jì)算各次試驗(yàn)的殺滅率。殺滅率均大于99.9%，可判為消毒合格。從中找出最小合格作用時(shí)間。
計(jì)算殺滅率公式如下：
 
式中：Nt為對(duì)照柜中試驗(yàn)菌的自然衰亡率，
 
兩式中：V0和Vt分別為對(duì)照組于0分鐘和試驗(yàn)開始后不同時(shí)間采樣回收的菌數(shù)。
Pt是不同消毒時(shí)間的殺滅率
Vo’和Vt’分別為試驗(yàn)組消毒前（0分鐘時(shí)）和消毒至不同時(shí)間采得的存活菌數(shù)。
B.1.4 現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)（或應(yīng)用試驗(yàn)）
    （1）本試驗(yàn)根據(jù)推薦使用的條件設(shè)計(jì)，選擇合適大小的房間（根據(jù)臭氧消毒設(shè)備產(chǎn)生臭氧量，通風(fēng)量等來(lái)選擇），將臭氧消毒裝置安裝在合理位置（一般為靠墻中間），室內(nèi)可以曾有人活動(dòng)，但試驗(yàn)時(shí)室內(nèi)必須無(wú)人。
（2）以室內(nèi)自然菌為試驗(yàn)微生物。采集的空氣中細(xì)菌數(shù)應(yīng)>102cfu/m3。
（3）先采取消毒前空氣樣品，然后開臭氧消毒裝置，并于不同時(shí)間（或推薦采用的某一時(shí)間）采取消毒后空氣樣品。
（4）采樣培養(yǎng)基為普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，采樣方法可用多級(jí)篩孔空氣沖擊式采樣器采樣，或用平皿沉降法采樣。前者要求采樣器置室中央1 m高處，房間大于10 m2者，每超過10 m2增設(shè)一個(gè)采樣點(diǎn)。后者按《消毒技術(shù)規(guī)范》執(zhí)行。
（5）培養(yǎng)：采樣后的培養(yǎng)基送37℃，48小時(shí)培養(yǎng)后觀察并記錄結(jié)果。
（6）計(jì)算殺滅率：用多篩孔采樣器，可用下述公式計(jì)算細(xì)菌消亡率：
 
用平皿沉降法采樣，可按《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版，第二分冊(cè)《醫(yī)院消毒技術(shù)規(guī)范》第20.7條計(jì)算消亡率。
（7）試驗(yàn)重復(fù)三次，各次細(xì)菌消亡率均≥90％為合格。